Bei der herkömmlichen PCR erfolgt der Nachweis durch die Gelelektrophorese und DNA-Färbung. Bei der Echtzeit-PCR erfolgt der Nachweis zur gleichen Zeit wie die Amplifikation durch Überwachung der Fluoreszenz nach jedem Heiz- und Kühlzyklus.Bei der Gelelektrophorese werden Moleküle in einem Gel gefiltert. Das Gel wird als Netz verwendet, sodass große Moleküle langsamer wandern als kleine Moleküle. Durch die Gelelektrophorese können Proteine und DNA analysiert werden.Als PCR (Polymerase-Chain-Reaction, Polymerase-Kettenreaktion) bezeichnet man eine künstlich herbeigeführte Vervielfältigung von bewusst ausgewählten DNA-Sequenzen.
Was kann man mit der Gelelektrophorese herausfinden : Das Prinzip der Gelelektrophorese kann auch dabei helfen, die Ähnlichkeit zwischen Personen zu identifizieren. Dabei dienen DNA-Proben als Marker, die dann mit DNA-Fragmenten anderer Personen verglichen werden. Anwendungsbeispiele sind: Genetischer Fingerabdruck in der Kriminologie.
Warum PCR vor Gelelektrophorese
Beide Proben werden zuerst mithilfe der Polymerase-Kettenreaktion (PCR) vervielfältigt. So hast du mehr Material, mit dem du Arbeiten kannst. Nach der Elektrophorese kannst du die Bandenmuster beider Proben miteinander vergleichen.
Wie funktioniert die PCR Biologie : Eine Polymerase-Kettenreaktion (PCR) ist die Vervielfältigung eines bestimmten DNA-Abschnitts vor einer DNA-Analyse. Ein PCR-Zyklus besteht aus den Schritten Denaturierung, Hybridisierung und Polymerisation. Dieser Zyklus wird so oft wiederholt, bis genügend DNA-Material vorhanden ist.
Der Mupid®-One ist ein CE-gekennzeichnetes Elektrophorese-System für Agarose-Gele. Der Elektrophorese-Tank wird direkt an das mitgelieferte Smart Power Netzteil angeschlossen. Das Gerät ist sehr kompakt und wird mit …
Befinden sich alle Bestandteile im Thermocycler, so kann das Gerät eingeschaltet werden und die PCR beginnen. Die Polymerase Kettenreaktion läuft in drei Schritten ab: der Denaturierung, Hybridisierung und Elongation.
Was ist der Zweck der PCR
Die Polymerase-Kettenreaktion („Polymerase Chain Reaction“ – PCR) ist die wichtigste Labormethode zur Untersuchung der molekularen Feinstruktur der Erbsubstanz (sogenannte „molekulare Diagnostik“).Die Serumelektrophorese wird durchgeführt, um andere Laborbefunde zu verifizieren und im Rahmen der Diagnostik bei u.a. Entzündungen, Autoimmunerkrankungen sowie der Verlaufskontrolle bei malignen Erkrankungen des blutbildenden Systems (z.B. bei multiplem Myelom, Lymphom, Leukämie).Am Ende aller PCR Zyklen erfolgt dann meist eine Trennung und Identifikation der erhaltenen DNA Fragmente anhand ihrer Länge. Denn das Ziel der PCR ist es, wie du bereits weißts, eine ganz bestimmte DNA Sequenz zu vervielfältigen.
Im Rahmen der Abklärung von Infektionskrankheiten stellen PCR-Verfahren eine direkte labormedizinische Nachweismöglichkeit dar – im Gegensatz zur serologischen Diagnostik, der Bestimmung von Antikörpern gegen beispielsweise Krankheitserreger im Blut.
Was benötigt man für die Gelelektrophorese : Für die Agarose-Gelelektrophorese werden benötigt:
- Die DNA, die nach ihrer Größe aufzutrennen ist.
- Eine DNA-Leiter, eine Mischung verschiedener DNA-Stränge bekannter Länge, mit der die DNA-Probe verglichen werden kann, um deren Größe zu bestimmen.
- TBE-Puffer, pH 8,0.
- Agarose.
Welche PCR Methoden gibt es : Unterschiedliche Arten von PCR Verfahren
Dazu gehören die quantitative PCR, um die Menge an DNA oder RNA zu messen, die Reverse Transkription PCR, um RNA in DNA umzuschreiben und die Multiplex-PCR, um mehrere DNA-Segmente gleichzeitig zu amplifizieren.
Was sagt der PCR Test aus
Wenn das Ergebnis des PCR-Tests positiv ist, bedeutet dies, dass eine Infektion mit dem Coronavirus SARS-CoV-2 nachgewiesen wurde. Das Labor, welches den Test ausgewertet hat, meldet das Ergebnis dem Gesundheitsamt.
Angewandt wird die Elektrophorese vor allem als Analyseverfahren in der Biologie und Medizin. Zu den wichtigsten Anwendungen gehören die Serumelektrophorese sowie die DNA-Analyse in Form von Fragmenten und DNA-Sequenzierung. Hierbei wird die Möglichkeit genutzt, Moleküle unterschiedlicher Länge voneinander zu trennen.Die Eiweißelektrophorese erlaubt präzise Rückschlüsse auf die Zusammensetzung der im Blut zirkulierenden Eiweiße. Die Untersuchung beruht darauf, dass die verschiedenen Bluteiweiße auf einer speziellen Folie unterschiedlich schnell wandern, wenn eine elektrische Spannung angelegt wird.
Wie lange dauert eine Gelelektrophorese :
| Agarose-Gelelektrophorese | |
|---|---|
| Methode | |
| Dauer der Messung pro Probe | ca. 1 Std 15 min abhängig von Proben und Gel (10 min vorbereiten, 30 min aushärten, 15-25 min an Strom angeschlossen, 10 min Check am PC) |
| Ausgabeformat | Optische Darstellung der Längen der DNA-/RNA-Fragmente |
| Bilder |